
在生命科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)診斷以及眾多相關(guān)領(lǐng)域,核酸提取作為一項(xiàng)基礎(chǔ)且關(guān)鍵的技術(shù),是開(kāi)啟后續(xù)深入研究的“鑰匙”。傳統(tǒng)手工核酸提取方法操作繁瑣、耗時(shí)久,且易受人為因素干擾,難以滿足現(xiàn)代科研對(duì)高效、精準(zhǔn)的需求。隨著科技的飛速發(fā)展,核酸提取儀應(yīng)運(yùn)而生,為科研實(shí)驗(yàn)帶來(lái)了革命性的改變,極大地提升了核酸提取的效率與質(zhì)量,博清生物科技(南京)有限公司研發(fā)生產(chǎn)的核酸提取儀成為科研人員不可或缺的得力助手。
核酸提取儀的工作原理與技術(shù)核心
博清生物科技(南京)有限公司研發(fā)生產(chǎn)的核酸提取儀的設(shè)計(jì)精妙,集成了多種先進(jìn)技術(shù)以實(shí)現(xiàn)高效、精準(zhǔn)的核酸提取。其核心原理基于不同物質(zhì)對(duì)核酸的吸附與分離特性,目前主流的技術(shù)包括磁珠法和柱式法。
磁珠法是當(dāng)前應(yīng)用廣泛且備受青睞的技術(shù)之一。在該方法中,磁珠表面經(jīng)過(guò)特殊處理,包被了能夠在特定條件下與核酸特異性結(jié)合的材料。當(dāng)含有核酸的樣本與磁珠混合時(shí),在高鹽低pH值環(huán)境下,核酸會(huì)吸附到磁珠表面。隨后,通過(guò)外部磁場(chǎng)的作用,可將吸附有核酸的磁珠分離出來(lái),棄去上清液,實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)的初步去除。接著,在低鹽高pH值條件下,核酸又會(huì)從磁珠上洗脫下來(lái),從而得到純化的核酸。整個(gè)過(guò)程中,儀器通過(guò)精確控制反應(yīng)體系的溫度、混合時(shí)間與力度等參數(shù),確保磁珠與核酸充分結(jié)合與分離,極大地提高了提取的效率與純度。同時(shí),磁珠法的自動(dòng)化程度高,減少了人工操作帶來(lái)的誤差,保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
柱式法則是利用硅膠膜對(duì)核酸的吸附特性。當(dāng)裂解后的樣本通過(guò)含有硅膠膜的離心柱時(shí),核酸會(huì)吸附在硅膠膜上,而蛋白質(zhì)、鹽等雜質(zhì)則隨濾液被去除。隨后,通過(guò)一系列洗滌步驟進(jìn)一步清除殘留雜質(zhì),最后使用洗脫液將核酸從硅膠膜上洗脫下來(lái)。在這個(gè)過(guò)程中,核酸提取儀能夠精準(zhǔn)控制離心力、液體流速等關(guān)鍵因素,優(yōu)化核酸與硅膠膜的結(jié)合及洗脫過(guò)程,實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量的核酸提取。
核酸提取儀在科研實(shí)驗(yàn)中的優(yōu)勢(shì)
高效自動(dòng)化操作
傳統(tǒng)手工核酸提取需要科研人員手動(dòng)完成樣本裂解、核酸吸附、洗滌、洗脫等多個(gè)繁瑣步驟,整個(gè)過(guò)程不僅耗時(shí)費(fèi)力,而且在處理大量樣本時(shí)效率極低。博清生物科技(南京)有限公司研發(fā)生產(chǎn)的核酸提取儀實(shí)現(xiàn)了全流程的自動(dòng)化,科研人員只需將樣本和相應(yīng)試劑按要求放置在儀器指定位置,設(shè)定好提取程序,儀器便會(huì)自動(dòng)運(yùn)行,連續(xù)、快速地完成多個(gè)樣本的核酸提取工作。以常見(jiàn)的16孔板設(shè)計(jì)的核酸提取儀為例,一次可同時(shí)處理16個(gè)樣本,極大地提高了實(shí)驗(yàn)通量,滿足了大規(guī)??蒲许?xiàng)目以及臨床檢測(cè)等對(duì)大量樣本快速處理的需求,為科研工作節(jié)省了大量寶貴時(shí)間。
高純度與高回收率
核酸提取的純度和回收率直接影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成敗。手工操作由于難以精確控制反應(yīng)條件和操作力度,容易導(dǎo)致核酸純度不高,且在多次轉(zhuǎn)移、洗滌過(guò)程中可能造成核酸損失,回收率較低。博清生物科技(南京)有限公司研發(fā)生產(chǎn)的核酸提取儀憑借其精密的儀器設(shè)計(jì)和精準(zhǔn)的參數(shù)控制,能夠?yàn)楹怂崽崛√峁┓€(wěn)定、適宜的反應(yīng)環(huán)境。在樣本裂解階段,可確保細(xì)胞充分破碎,核酸完全釋放;在吸附、洗滌過(guò)程中,能有效去除蛋白質(zhì)、多糖、鹽離子等雜質(zhì),同時(shí)最大程度減少核酸的丟失,從而獲得高純度、高回收率的核酸產(chǎn)物。經(jīng)核酸提取儀提取的核酸,其純度和完整性通常能夠滿足各類高端科研實(shí)驗(yàn)的要求,如二代測(cè)序、熒光定量PCR等對(duì)核酸質(zhì)量極為嚴(yán)苛的實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠
人為因素是導(dǎo)致手工核酸提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異的重要原因之一,不同操作人員的技術(shù)熟練程度、操作習(xí)慣以及在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的狀態(tài)等,都可能對(duì)提取結(jié)果產(chǎn)生影響,使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性和可比性較差。核酸提取儀通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化的操作流程,嚴(yán)格控制每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟的參數(shù),減少了人為因素的干擾。無(wú)論在何時(shí)、由何人操作,只要實(shí)驗(yàn)條件相同,都能獲得穩(wěn)定、一致的核酸提取結(jié)果。這種高度的穩(wěn)定性和可靠性為科研實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性提供了堅(jiān)實(shí)保障,使得科研人員能夠更加自信地基于實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行深入分析和研究。
核酸提取儀的實(shí)驗(yàn)流程解析
樣本準(zhǔn)備
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x取合適的樣本,常見(jiàn)的樣本類型包括血液、組織、細(xì)胞、細(xì)菌、病毒等。不同樣本的預(yù)處理方式有所不同。例如,血液樣本通常需要先進(jìn)行離心處理,分離出血漿或血清;組織樣本則需經(jīng)過(guò)勻漿處理,將組織塊破碎成單細(xì)胞懸液,以便后續(xù)裂解。在樣本準(zhǔn)備階段,確保樣本的新鮮度和完整性至關(guān)重要,避免樣本受到污染或發(fā)生核酸降解 。
樣本裂解
將預(yù)處理后的樣本加入到含有裂解液的反應(yīng)體系中。裂解液的成分根據(jù)樣本類型和核酸提取方法的不同而有所差異,其作用是破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜,使核酸釋放到溶液中。核酸提取儀通過(guò)振蕩、混合等方式,確保樣本與裂解液充分接觸,細(xì)胞得以充分裂解。同時(shí),儀器可根據(jù)需要精確控制裂解過(guò)程的溫度和時(shí)間,以達(dá)到最佳的裂解效果。
核酸吸附與洗滌
若采用磁珠法,在樣本裂解液中加入磁珠懸浮液并充分混勻,使核酸吸附到磁珠表面。隨后,利用儀器內(nèi)置的磁場(chǎng)裝置將磁珠吸附在反應(yīng)容器一側(cè),倒掉上清液,完成核酸與雜質(zhì)的初步分離。接著,加入洗滌液,通過(guò)振蕩、混合和磁場(chǎng)分離等操作,多次洗滌磁珠,去除殘留的蛋白質(zhì)、鹽等雜質(zhì)。柱式法的操作則是將裂解液加入到含有硅膠膜的離心柱中,通過(guò)離心使核酸吸附在硅膠膜上,棄去濾液,然后用洗滌液多次洗滌硅膠膜,去除雜質(zhì)。
核酸洗脫
在完成洗滌步驟后,向含有吸附核酸的磁珠或硅膠膜的反應(yīng)體系中加入洗脫液。洗脫液的成分和 pH 值經(jīng)過(guò)優(yōu)化,能夠破壞核酸與磁珠或硅膠膜之間的結(jié)合力,使核酸從吸附介質(zhì)上洗脫下來(lái),收集含有核酸的洗脫液,即完成了核酸提取的全過(guò)程。
濃度與純度檢測(cè)
提取得到的核酸需要進(jìn)行濃度和純度檢測(cè),以評(píng)估提取效果是否滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。常用的檢測(cè)方法包括紫外分光光度計(jì)法和熒光定量法。紫外分光光度計(jì)通過(guò)測(cè)量核酸在260nm和280nm波長(zhǎng)處的吸光度,計(jì)算A260/A280比值來(lái)評(píng)估核酸純度,純凈的DNA樣本該比值應(yīng)在1.8左右,RNA樣本應(yīng)在2.0左右;同時(shí),根據(jù)260nm處的吸光度值可推算出核酸的濃度。熒光定量法則是利用熒光染料或熒光探針與核酸特異性結(jié)合,通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度來(lái)精確測(cè)定核酸濃度,該方法靈敏度更高,尤其適用于低濃度核酸樣本的檢測(cè)。
文章來(lái)源:http://www.boqinglab.com
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